【明美光電】TIRF為加強(qiáng)顯微熒光影像軸向解析度之一種光學(xué)技術(shù)，此技術(shù)最適用于觀察貼近蓋玻片表面區(qū)域之熒光樣本，實(shí)現(xiàn)熒光顯微鏡觀察細(xì)胞膜相關(guān)生理作用，及活體外單分子交互作用之研究等。由于此類樣本所需觀察的z軸范圍僅約100 nm厚，即易受離蓋玻片表面較遠(yuǎn)區(qū)域所產(chǎn)生之熒光訊號(hào)干擾，影響觀察范圍的影像清晰度。
TIRF 熒光顯微鏡利用物理光學(xué)全內(nèi)反射原理，使用可調(diào)整入射角度之雷射光源，配合高孔徑值之物鏡，使雷射光由物鏡入射至樣本時(shí)，在蓋玻片與樣本介質(zhì)(主要為水溶液)之交界面，產(chǎn)生光學(xué)全內(nèi)反射現(xiàn)象。此現(xiàn)象使光源不至于穿透交界面而激發(fā)整體樣本，只有距蓋玻片表面厚度不到200nm的范圍內(nèi)之區(qū)域?yàn)槭芗ぐl(fā)范圍，且受激強(qiáng)度隨著與蓋玻片表面之距離呈等比級(jí)數(shù)下降。因受激發(fā)的范圍大量減少，此技術(shù)可避免非焦面之樣本產(chǎn)生發(fā)散熒光，故能解決非焦面熒光雜光之問(wèn)題，達(dá)到光學(xué)切片之清晰化效果。
熒光顯微鏡TIRF技術(shù)研發(fā)由來(lái)已久，早在1981即有第一篇相關(guān)論文發(fā)表。經(jīng)多年發(fā)展，在雷射導(dǎo)引光路設(shè)計(jì)、雷射角度調(diào)整、物鏡NA值、適用之浸油及蓋玻片等各方面均不斷改良。
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