FISH技術(shù)介紹及熒光顯微鏡應(yīng)用
熒光原位雜交(Fluorescence in situ hybridization,F(xiàn)ISH)是應(yīng)用熒光染料標(biāo)記探針DNA,以熒光標(biāo)記取代同位素標(biāo)記組織、細(xì)胞核或染色體DNA進(jìn)行雜交的一種研究DNA序列在染色體上位置的新的原位雜交方法,常被稱為是生命科學(xué)的“釣魚”技術(shù)。利用這一技術(shù)可對待測核酸定性、定位或相對定量的分析。
傳統(tǒng)的原位雜交方法是將標(biāo)記的核酸探針與細(xì)胞或組織中的核酸進(jìn)行雜交后采用放射自顯影進(jìn)行檢測,這種檢測限制了雜交技術(shù)的廣泛應(yīng)用,20世紀(jì)末由于人類基因組計(jì)劃的啟動,F(xiàn)ISH技術(shù)得到了迅速的發(fā)展和廣泛的應(yīng)用。
FISH技術(shù)是一種非放射性原位雜交技術(shù),結(jié)合了生物學(xué)和細(xì)胞遺傳學(xué),將真核生物細(xì)胞的染色體區(qū)帶與特定DNA片段聯(lián)系起來的一種快速而直接的檢測手段,廣泛應(yīng)用于生物學(xué)研究中,可作為免疫組化表達(dá)初步篩查的首選方法,提高了基因定位的準(zhǔn)確性。
利用DNA堿基對的互補(bǔ)性,將直接標(biāo)記了熒光的單鏈DNA(探針)和與其互補(bǔ)的目標(biāo)樣本的DNA(玻片上的標(biāo)本)雜交,通過觀察熒光信號在染色體上的位置反映相應(yīng)染色體的情況。 |
通過熒光顯微鏡觀察雜交信號。FISH在熒光顯微鏡下可以確認(rèn)出腫瘤所在的位置。
因其安全性高、特異性好、快速準(zhǔn)確,可以同時檢測多種序列、使用周期長,在基因定位、染色體結(jié)構(gòu)分析與數(shù)目測定、人類產(chǎn)前診斷、病毒感染分析、腫瘤遺傳學(xué)等方面都發(fā)揮了不容小覷的作用。 今后在研究細(xì)胞核骨架與基因表達(dá)的關(guān)系、基因擴(kuò)增,基因組結(jié)構(gòu)與哺乳動物的染色體調(diào)控等領(lǐng)域?qū)鸬椒e極的作用。
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